96 Uitrustingen van de Testelisa Test voor Kanamycin Opsporings Hoge Reproduceerbaarheid

Kanamycin ELISA Test Kit

Productomschrijving

Kanamycin ^™ ELISA Test Kit van REAGEN is concurrerende enzymimmunoassay voor de kwantitatieve analyse van Kanamycin in vlees/lever/nier, cel lysate, urine, serum en melk.

De unieke eigenschappen van de uitrusting zijn:

• Hoge terugwinning (>80%), snelle (10-40 minuten), en rendabele extractiemethodes.

• De opsporingsgrens is 0,2 ng/g.

• Hoge reproduceerbaarheid.

• Een snelle ELISA-analyse (uren minder dan 1 ongeacht aantal steekproeven).

Procedureoverzicht

De methode is gebaseerd op een concurrerende colorimetrische ELISA-analyse. Kanamycin-BSA is met een laag bedekt in de plaatputten. Tijdens de analyse, steekproef en Kanamycin worden het antilichaam (Antilichaam #1) en de HRP-Stamverwant (HRP-Vervoegd Antilichaam #2) toegevoegd aan de putten voor incubatie. Als het Kanamycin residu in de steekproef aanwezig is, zal het met Kanamycin op de plaatputten voor het Kanamycin antilichaam, het secundaire die antilichaam concurreren, met een peroxidaseenzym wordt geëtiketteerd, richt het primaire die antilichaam dat aan de drug gecompliceerd wordt op de plaatputten met een laag wordt bedekt. De resulterende kleurenintensiteit, na toevoeging van het HRP-substraat (TMB), heeft een omgekeerde verhouding met de Kanamycin residuconcentratie in de steekproef.

Kit Contents, Opslag en Houdbaarheid

Kanamycin ^™ ELISA Test Kit van REAGEN heeft de capaciteit voor 96 bepalingen of het testen in tweevoud van 42 steekproeven (veronderstellend 12 putten voor normen). Keer om het even welke ongebruikte die microwells naar de foliezak terug en verzegel hen met het deshydratiemiddel opnieuw in het originele pakket wordt verstrekt. Sla de uitrusting bij 2-8°C op *. De houdbaarheid is 12 maanden wanneer de uitrusting behoorlijk wordt opgeslagen.

Als u niet van plan bent om de uitrusting meer dan 1 maand te gebruiken, opslagkanamycin Standaardvoorraad, Kanamycin Antilichamen#1and HRP-Vervoegd Antilichaam #2 bij -20°C of in een diepvriezer.

Gevoeligheid (Opsporingsgrens)

Specificiteit (Cross-Reactivity)

Vereiste die Materialen niet van de Uitrusting worden voorzien

• Microtiter plaatlezer (450 NM)

• Weefselmixer (b.v. Omni-Weefsel Hoofdhomogenisator)

• Draaikolkmixer (b.v. Genie Vortex-mixer van VWR)

• 10, 20, 100 en 1000 uLpipetten

• Pipet met meerdere kanalen: 50-300 (Facultatieve) uL

Waarschuwingen en Voorzorgsmaatregelen

• De normen bevatten Kanamycin. Handvat met bijzondere zorg.
• Gebruik niet de uitrusting voorbij de vervaldatum.
• Vermeng reagentia van verschillende uitrustingen of geen partijen behalve componenten met hetzelfde artikelnummer binnen hun vervaldata. DE ANTILICHAMEN EN DE PLATEN ZIJN UITRUSTING-EN PARTIJ-SPECIFIEK.
• Probeer om een laboratoriumtemperatuur van 20°-25°C (68°-77°F) te handhaven. Vermijd lopend analyses onder of dichtbij luchtopeningen, aangezien dit het bovenmatige koelen, het verwarmen en/of verdamping kan veroorzaken. Ook, stel geen analyses in direct zonlicht in werking, aangezien dit bovenmatige hitte en verdamping kan veroorzaken. De koude bankbovenkanten zouden moeten worden vermeden door verscheidene lagen van keukenrol of wat ander isolatiemateriaal onder de analyseplaten tijdens incubatie te plaatsen.
• Zorg ervoor u slechts gedistilleerd of gedeioniseerd water gebruikt aangezien de waterkwaliteit zeer belangrijk is.
• Wanneer het pipetting van steekproeven of reagentia in een lege microtiter plaat, plaats de pipetuiteinden goed in de lagere hoek van, opnemend contact met het plastiek.
• De incubaties van analyseplaten vastgesteld zo nauwkeurig mogelijk moeten zouden zijn. Verenigbaar ben wanneer het toevoegen van normen aan de analyseplaat. Voeg eerst uw normen toe en dan uw steekproeven.
• Voeg normen aan plaat slechts in de orde van lage concentratie aan hoge concentratie toe aangezien dit het risico zal minimaliseren om de standaardkromme te compromitteren.
• Koel altijd platen in verzegelde zakken met een deshydratiemiddel om stabiliteit te handhaven. Verhinder condensatie op platen zich te vormen door hen toe te staan in evenwicht brengen aan kamertemperatuur (20 – 25°C/68 – 77°F) terwijl in de verpakking.

Zeker ben de steekproeven behoorlijk worden opgeslagen. In het algemeen, zouden de steekproeven bij 2-4°C voor neen meer moeten worden gekoeld dan 1-2 dagen. Vorststeekproeven aan een minimum van -20°C als zij voor een langere periode moeten worden opgeslagen. De bevroren steekproeven kunnen bij ruimte temps (20 – 25°C/68 – 77°F) of in een ijskast v3o3or gebruik worden ontdooid.

• Voorbereiding van 1×Sample-verdunner: Mengeling 1 volume van 10×Sample-verdunner met 9 volumes van gedistilleerd water.
• Voorbereiding van de buffer van 1×Sample Ext.: Mengeling 1 volume van de buffer van 10×Sample Ext. met 9 volumes van gedistilleerd water.

Cel Lysate

• Neem uL 100 van cel lysate, voeg goed uL 900 van 1×Sample-verdunnerbuffer toe, mengeling.

• Centrifugeer 5 minuten bij 4000 x g.

• Neem goed uL 50 van de bovendrijvende substantie per voor de analyse.

Nota: Verdunningsfactor: 10.

Garnalen/Visvlees/Lever/Nier

• Aan 1,0 g van de gehomogeniseerde steekproef, voeg 4.0mL van de buffer van 1×Sample toe Ext.,

• Draaikolk de steekproef voor minuten 1 met draaikolkmixer.

• Centrifugeer de steekproef 5 minuten bij 4.000 x g.

• Zorgvuldig voegt de overdracht 200uL van de hoogste laag aan een nieuwe buis, 1.375ml1X-Steekproefverdunneren25uLvandeBuffervan hetSteekproefsaldo, draaikolk30seconden toe.

• Gebruik 50uL per goed voor de analyse.

Nota: Verdunningsfactor: 40.

Urine/Serum

• Neem 50uL van urine of de serumsteekproef, voegt goed 1,2 ml 1X-Steekproefverdunner toe, mengeling.

• Centrifugeer 5 minuten bij 4.000 x g.

• Neem goed 50uL van de bovendrijvende substantie per voor de analyse.

Nota: Verdunningsfactor: 25.

Melk

• Voeg 100uL van melksteekproef in een centrifugebuis toe, voeg 900uL van 1X-Steekproefverdunner toe.
• Draaikolk krachtig 30 seconden.
• Centrifugeer bij 4.000 x g 10 minuten.
• Gebruik 50uL van de bovendrijvende steekproef voor de analyse.

Nota: Verdunningsfactor: 10

KANAMYCIN ELISA HET PROTOCOL VAN DE TESTuitrusting

Reagensvoorbereiding

BELANGRIJK: Alle reagentia zouden tot kamertemperatuur v3o3or gebruik moeten worden gebracht (1 – 2 uren bij 20 – 25°C/68 – 77°F); Zorg ervoor u „Waarschuwingen en Voorzorgsmaatregelen“ sectie over pagina 3 leest. De oplossingen zouden enkel voorafgaand aan ELISA-test moeten worden voorbereid. Alle reagentia zouden moeten worden gemengd door zacht voorafgaand aan gebruik om te keren of te wervelen. Bereid volumes voor die voor het aantal putten die nodig zijn in werking worden gesteld. Keer niet de reagentia naar de originele voorraadbuizen/de flessen terug. Het gebruiken van beschikbare reservoirs wanneer de behandelende reagentia het risico van verontreiniging kunnen minimaliseren en geadviseerd.

• Voorbereiding van 1X-Wasoplossing

Mengeling 1 volume van de 20X-Wasoplossing met 19 volumes van gedistilleerd water.

ELISA Testing Protocol

Etiketteer de individuele stroken die en gedeeltereagentia als volgend voorbeeld zullen worden gebruikt:

• Voeg uL 50 in tweevoud van elke Kanamycin Normen in verschillende putten (voeg normen aan plaat slechts in de orde van lage concentratie aan hoge concentratie toe) toe.

• Voeg uL 50 in tweevoud van elke steekproef in verschillende steekproefputten toe.

• Voeg uL 50 goed van HRP-Vervoegde Ab#2 aan elk en uL 50 van Kanamycin Antilichaam #1 aan elk toe goed. Mengeling goed door de plaat voor jaren '30 manueel zacht te schommelen.

• Broed de plaat 30 minuten uit bij kamertemperatuur (20 – 25°C/68 – 77°F). (Vermijd direct zonlicht en koude bankbovenkanten tijdens de incubatie. Het behandelen van de microtiter plaat terwijl het uitbroeden wordt geadviseerd).

• Was de plaat 4 keer met uL 250 van 1X-Wasoplossing. Na de laatste was, keer de plaat om en onttrek zacht de plaat droog op keukenrollen (voer de volgende stap onmiddellijk na plaatwassen uit. Sta niet de plaat toe om tussen werkende stappen) aan de lucht te drogen.

• Voeg uL 100 van TMB-substraat toe. Tijd de reactie onmiddellijk na het toevoegen van het substraat. Meng de oplossing door de plaat voor jaren '30 manueel zacht te schommelen terwijl het uitbroeden (zet geen substraat terug naar de originele container om eender welke potentiële verontreiniging te vermijden. Om het even welke substraatoplossing die kleuring tentoonstelt is indicatief van verslechtering en zou moeten worden verworpen. Het behandelen van de microtiter plaat terwijl het uitbroeden wordt geadviseerd).

• Na het uitbroeden 15 minuten bij kamertemperatuur (20 – 25°C/68 – 77°F), voeg uL 100 van Eindebuffer toe om de enzymreactie tegen te houden.

• Lees zo spoedig mogelijk de plaat na de toevoeging van Eindebuffer op een plaatlezer met 450 NM-golflengte (vóór het lezen, gebruik lint-free afvegen op de bodem van de plaat om geen vochtigheid te verzekeren of de vingerafdrukken mengen zich in de lezingen).

Kanamycin Concentratieberekeningen

Een standaardkromme kan worden geconstrueerd door de gemiddelde relatieve die absorbering (%) in kaart te brengen uit elke verwijzingsnorm tegen zijn concentratie in ng/mL op een logaritmische kromme wordt verkregen.

Relatieve absorbering (%) = absorbering nul standaard of steekproef x 100

Gebruik de gemiddelde relatieve absorberingswaarden voor elke steekproef om de overeenkomstige concentratie van de geteste drug in ng/mL van de standaardkromme te bepalen.

Het volgende cijfer is een typische chlooramphenicol standaardkromme.