96 Test ELISA-testkits voor detectie van kanamycine met hoge reproduceerbaarheid

Kanamycine ELISA-testkit

Productbeschrijving

De Commissie^TMKanamycine ELISA Test Kit is een concurrerende enzymimmunoassay voor de kwantitatieve analyse van kanamycine in vlees/lever/nier, cellysat, urine, serum en melk.

De unieke kenmerken van de kit zijn:

• Hoge terugwinning (> 80%), snelle (10-40 minuten) en kosteneffectieve extractiemethoden.

• De detectiegrens is 0,2 ng/g.

• Hoge reproduceerbaarheid.

• Een snelle ELISA-test (minder dan 1 uur, ongeacht het aantal monsters).

Overzicht van de procedure

De methode is gebaseerd op een competitieve colorimetrische ELISA-analyse.het monster en het kanamycine-antilichaam (antilichaam #1) en het HRP-conjugate (HRP-conjugated antilichaam #2) worden toegevoegd aan de putten voor incubatieAls het kanamycine-residu in het monster aanwezig is, zal het concurreren met het kanamycine op de plaatputten voor het kanamycine-antilichaam, het secundaire antilichaam, getagd met een peroxidase-enzym,richt zich op het primaire antilichaam dat is gecomplexeerd aan het op de plaatputten gecoate medicijnDe resulterende kleurintensiteit, na toevoeging van het HRP-substraat (TMB), heeft een omgekeerde relatie met de concentratie van kanamycine residu in het monster.

Inhoud, opslag en houdbaarheid

De Commissie^TMDe kanamycine-ELISA-testkit is geschikt voor 96 determinaties of testen van 42 monsters in duplicaat (als men 12 putten voor de normen neemt).Gebruikte microgaten in de foliezak terugbrengen en opnieuw afsluiten met het droogmiddel dat in de originele verpakking is meegeleverdDe houdbaarheid is 12 maanden wanneer de kit correct wordt bewaard.

Als u niet van plan bent de kit langer dan 1 maand te gebruiken, bewaart u Kanamycin Standard Stock, Kanamycin Antibody #1 en HRP-Conjugated Antibody #2 bij -20°C of in de vriezer.

Gevoeligheid (detectiegrens)

Specificiteit (kruisreactiviteit)

Verplichte materialen zijn niet bij de kit meegeleverd

• Microtiterplatenlezer (450 nm)

• Weefselmixer (bijv. Omni Tissue Master Homogenizer)

• Vortexmixer (bijv. Genie Vortexmixer van VWR)

• 10, 20, 100 en 1000 IU pipetten

• Meerkanaalpipet: 50-300 IU (facultatief)

Waarschuwingen en voorzorgen

• De standaarden bevatten kanamycine.
• Gebruik de kit niet na de vervaldatum.
• Vermeng reagentia uit verschillende kits of partijen niet, behalve voor componenten met dezelfde onderdelennummers binnen hun vervaldatum.
• Probeer een laboratoriumtemperatuur te handhaven van 20° 25° C (68° 77° F). Vermijd het uitvoeren van proeven onder of in de buurt van luchtluchten, omdat dit tot overmatige koeling, verwarming en/of verdamping kan leiden.niet in direct zonlicht testen, aangezien dit tot overmatige hitte en verdamping kan leiden.Gedurende de incubatie moeten koude bankplaten worden vermeden door verschillende lagen papieren handdoeken of ander isolatiemateriaal onder de testplaten te plaatsen..
• Zorg ervoor dat u alleen gedistilleerd of gedeïoniseerd water gebruikt, aangezien de waterkwaliteit erg belangrijk is.
• Wanneer monsters of reagentia in een lege microtiterplaat worden gepipetteerd, moet de pipettop in de onderste hoek van de put worden geplaatst, zodat deze in contact komt met het plastic.
• Het is belangrijk dat de testplaat zo nauwkeurig mogelijk wordt ingepland.
• Voeg alleen in de volgorde van lage concentratie tot hoge concentratie normen toe aan de plaat, omdat dit het risico van het in gevaar brengen van de standaardcurve tot een minimum beperkt.
• Platen in verzegelde zakken altijd in de koelkast bewaren met een droogmiddel om de stabiliteit te behouden.Vermijd dat condens op de platen ontstaat door ze in evenwicht te laten komen tot kamertemperatuur (20°C / 68°F)..

Zorg ervoor dat de monsters goed worden bewaard. In het algemeen moeten de monsters niet langer dan 1-2 dagen bij 2-4°C in de koelkast worden gehouden.Bevroren monsters kunnen worden ontdooid bij kamertemperatuur (20°C / 68°F) of in de koelkast voordat ze worden gebruikt..

• Voorbereiding van 1 × monsterverdunningsmiddel:Meng 1 volume 10×monsterverdunner met 9 volumes gedistilleerd water.
• Voorbereiding van 1 ×Buffer van de steekproef:Meng 1 volume 10 × Sample Ext. buffer met 9 volumes gedistilleerd water.

Cellenlysat

• Neem 100 liter cellysat, voeg 900 liter 1 × monsterverdunner Buffer toe en meng goed.

• Centrifugeer gedurende 5 minuten bij 4000 x g.

• Neem 50 liter supernatant per put voor de test.

Opmerking: Verdunningsfactor: 10.

Garnalen/Vissen/Vlees/Lever/Nier

• Aan 1,0 g van het gehomogeniseerde monster wordt 4,0 ml 1 × Sample Ext. buffer toegevoegd.

• Vortex het monster gedurende 1 minuut met een vortexmixer.

• Centrifugeer het monster gedurende 5 minuten bij 4.000 x g.

• Verplaats voorzichtig 200uL van de bovenste laag naar een nieuwe buis,voeg 1 toe.375 ml van 1 X Probeverdundelaar en 25 uL van Probe Balance Buffer, vortex gedurende 30 seconden.

• Gebruik 50uL per put voor de test.

Notitie: Verdunningsfactor: 40.

Urine/serum

• Neem 50uL urine- of serummonster, voeg 1,2 ml van 1x Proefverdunner toe en meng het goed.

• Centrifugeer gedurende 5 minuten bij 4.000 x g.

• Neem 50uL supernatant per put voor de test.

Opmerking: Verdunningsfactor: 25.

Melk

• Voeg 100uL melkmonster in een centrifugebuis toe, voeg 900uL van 1x monsterverdunningsmiddel toe.
• Vortex krachtig gedurende 30 seconden.
• Centrifugeer bij 4000 x g gedurende 10 minuten.
• Gebruik 50uL van het supernatantmonster voor de test.

Opmerking: Verdunningsfactor:10

KANAMYCIN ELISA TEST KIT Protocol

Voorbereiding van reagentia

BELANGRIJK: Alle reagentia moeten vóór gebruik op kamertemperatuur worden gebracht (1 2 uur bij20 ¢ 25°C / 68 ¢ 77°F); Lees de sectie "Waarschuwingen en voorzorgsmaatregelen" opbladzijde3.Alle reagentia moeten worden gemengd door voor het gebruik zachtjes om te draaien of te wervelen.Geef de reagentia niet terug in de oorspronkelijke voorraadbuizen/flessenHet gebruik van wegwerpreservoirs bij het hanteren van reagentia kan het risico op besmetting minimaliseren en wordt aanbevolen.

• Bereiding van 1X wasoplossing

Meng 1 volume van de 20x wasoplossing met 19 volumes gedistilleerd water.

ELISA-testsysteem

De afzonderlijke gebruikte strippen en de ondergeschikte reagentia worden als volgt gemarkeerd:

• Voeg 50 liter van elk kanamycine-standaard in dubbele vorm in verschillende putten toe (Voeg alleen standaarden in de volgorde van lage tot hoge concentratie toe aan de plaat).

• 50 liter van elk monster in dubbele vorm in verschillende bemonsteringsputten worden toegevoegd.

• Voeg 50 liter HRP-Conjugated Ab#2 toe aan elke put en 50 liter Kanamycine-antilichaam # 1 aan elke put.

• Incuberen van de plaat gedurende 30 minuten bij kamertemperatuur (20 ¢ 25°C / 68 ¢ 77°F). (Vermijd direct zonlicht en koude bankplaten tijdens de incubatie (het wordt aanbevolen de microtiterplaat te bedekken tijdens de incubatie).

• Na het laatste wassen, de plaat omdraaien en zachtjes stampen op de plaat droog op papieren handdoeken (De volgende stap onmiddellijk na het wassen van de platen.Laat de plaat tussen de werkstappen niet in de lucht drogen).

• Voeg 100 liter TMB-substraat toe. Tijd de reactie onmiddellijk na het toevoegen van het substraat. Meng de oplossing door de plaat voorzichtig handmatig te schudden gedurende 30 seconden tijdens de incubatie.Vermijd eventuele besmetting door geen enkel substraat in de oorspronkelijke container terug te brengen.Het wordt aanbevolen de microtiterplaat te bedekken tijdens de incubatie).

• Na 15 minuten incubatie bij kamertemperatuur (20 ¢ 25°C / 68 ¢ 77°F), voeg 100 liter Stop Buffer toe om de enzymreactie te stoppen.

• Lees de plaat zo snel mogelijk na toevoeging van Stop Buffer op een plaatlezer met een golflengte van 450 nm (Voordat u de plaat leest, moet u de afbeelding van de plaat met de stopbuffer op de plaat lezen).gebruik een lintvrij doekje op de bodem van de plaat om ervoor te zorgen dat vocht of vingerafdrukken de metingen niet verstoren).

Berekeningen van de kanamycineconcentratie

Een standaardcurve kan worden geconstrueerd door de gemiddelde relatieve absorptie (%) van elke referentiestandaard op een logaritmische curve te vergelijken met de concentratie in ng/mL.

Relatieve absorptie (%) =absorptie nul standaardof monster x 100

Gebruik de gemiddelde relatieve absorptiewaarden voor elk monster om de overeenkomstige concentratie van het geteste geneesmiddel in ng/ml te bepalen op basis van de standaardcurve.

De volgende figuur is een typische standaardcurve voor chloramfenicol.